红桃成人传媒

在细胞体外培养中，污染如同潜伏的“隐形杀手"，时刻威胁着实验的准确性与稳定性。在最常见的叁大污染源——支原体、细菌和真菌中，支原体污染以 30%-60% 的超高污染率，成为科研人员最头疼的难题之一。本期细胞学堂，我们将全-方位解析支原体污染的防治要点，助你轻松应对这一实验室“顽疾"，为细胞培养实验保驾护航。

自然界中支原体种类超过120种，而细胞培养中常见污染菌株主要包括牛精氨酸支原体、发酵支原体、猪鼻支原体、人口腔支原体、牛无胆甾支原体等。这些菌株污染细胞后，会引发细胞一系列特征性改变，包括：

这些变化缺乏特异性，但会干扰细胞正常生理状态，导致实验结果失真甚至错误。由于支原体的直径仅0.1-0.3 μm，远小于常规细胞，且无细胞壁，折光性极低，因此难以通过普通光学显微镜识别。加之其对青霉素等常用抗生素具有耐药性，进一步增加了污染检测和清除的难度。因此，上述细胞表型的异常改变往往成为污染的早期预警信号—— 当细胞出现不明原因的生长或形态异常时，需优先排查支原体污染可能。

表1. 支原体检测方法对比

支原体的耐受温度范围在35-37℃，将污染的细胞置于41℃处理5-10 h（最长不超过18 h），可以杀灭支原体。但不同的细胞对高温的耐受程度不同，此方法可能损伤细胞，需要慎重使用。

支原体对部分抗生素（如卡那霉素、庆大霉素、多西环素、四环素、环丙沙星等）具有一定的敏感性。将细胞培养在含抗生素的培养基中传代培养，连续多次检测支原体为阴性，即清除成功。但过度使用抗生素可能诱导耐药或毒性反应，需谨慎操作。

推荐使用复合型支原体清除试剂，其通常含有抗生素和支原体脂蛋白膜穿透剂，能破坏支原体的脂蛋白膜、干扰其代谢途径、抑制DNA复制，从而达到清除支原体的目的。推荐产物：红桃成人传媒Anti-Myc 支原体清除试剂（货号：P-CMR-001）。按照说明书将适量试剂加入细胞培养基孵育，即可清除支原体。该方法操作简便、效果-显着，且对细胞的毒性相对较小，能较好地保持细胞的活性。

对清除支原体后的细胞，需通过 qPCR、DNA荧光染色等方法进行检测，确认支原体是否已被完-全清除，避免试剂残留或支原体复苏导致假阴性结果。